【摘要】 目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(trail)的死亡受体5(dr5)单抗y366e引起jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗dr5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366e作用下jurkat细胞形态变化,并利用tt法检测jurkat细胞的增殖,利用fitannexin v及pi标记流式细胞仪检测交联y366e对jurkat细胞凋亡率影响。进一步用estern blt法检测交联y366e作用于jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时bl2、yt、bax、aspase3、aspase9的表达变化。结果:dr5抗体y366e单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠igg交联366e后可致jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导trail敏感的jurkat细胞凋亡改变。estern blt检测到随着抗体诱导时间的延长jurkat细胞bl 2蛋白表达减少;yt、bax、有活性的aspase3和aspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗dr5抗体y366e对jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到yt、bax、aspase3、aspase9。
【关键词】 交联 jurkat细胞 抗dr5抗体 凋亡 流式细胞术 免疫印迹
the study n the apptsis ehanis f the jurkat ell indued by rss linking antidr5 antibdyy366e
bai huiling,du yau,ang xueyin,li shulian,ang jing,liu guangha,a yuanfang.
researh institute f iunlgy henan university, labratry f ell and leule iunlgy, henan university,kaifeng 475004, hina
[abstrat]bjetive:t detet the effet f rsslinking antidr5 y366e antibdy n the jurkat ells, and t eluidate the anti tuur ehanis f antidr5 antibdy.ethds:rphlgi hanges f jurkat ells ere bserved by a irspe;yttxi and apptti effets f rsslinking antidr5 t jurkat ells ere deteted by tt and f assays.bl2,yt,aspase3,bax and aspase9 ere deteted ith estern blt.results:hratin aggregatin,budding and apptti bdies ere seen in jurkat ells treated by rsslinking antidr5 antibdy;viability f jurkat ells as dereased and apptsis inreased bviusly.expressin f bl2,yt,aspase3,bax and aspase9 ere deteted, and they ere hanged ith tie f rsslinking antidr5 antibdy treated.nlusin:apptsis f jurkat ell an be indued by the rsslinking antidr5 antibdy, and the apptsis signal pathay ay be relevant t yt,aspase3,bax and aspase9.
[key rds] rsslink;jurkat ell;antidr5 antibdy;apptsis;fl ytetry;estern blt
白血病是近年来比较高发的疾病,尤其在儿童人群中较为明显,并呈上升趋势。有关白血病治疗、发病机制的研究一直很受关注,目前已经取得了一定进展。肿瘤坏死因子(tnf)相关的凋亡诱导配体(tnfrelated apptsis induing ligand, trail)能够诱导多种肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡, trail诱导肿瘤细胞凋亡是通过其受体trailr1(death reeptr4 dr4)及trailr2(death reeptr5 dr5)介导的,但一些研究发现trail对正常肝细胞有毒性作用,限制了其临床应用[1,2]。一些抗trail死亡受体单抗具有死亡受体配体的功能活性,能模拟trail的作用,诱导肿瘤细胞凋亡,而且对人正常肝细胞等没有毒副作用[3,4]。本实验室利用人dr5蛋白免疫balb/小鼠,制备出抗dr5的单克隆抗体,命名为y366e,我们研究发现该抗体交联后对jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用,可以明显诱导trail敏感的白血病细胞jurkat细胞凋亡,为此我们以jurkat细胞株为靶细胞,探讨了抗dr5抗体y366e的抗肿瘤效应机制,为进一步临床治疗白血病提供理论根据[57]。
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