【摘要】 目的： 研究 BIQ对肺泡上皮细胞株A549氧化损伤的保护作用. 方法 ： 应用 TT法检测不同浓度BIQ对正常及过氧化氢（H22）损伤的肺泡上皮细胞株A549的保护作用；DNA Ladder检测细胞凋亡；相差显微镜观察Hehst染色后细胞凋亡形态的变化. 结果： H22损伤后的A549细胞经不同浓度BIQ处理后，细胞死亡数明显减少. 浓度为1×10-2，1×10-3 l/L的BIQ组平均细胞存活率分别为(76.1±0.8)%，(71.3±1.0)%，较损伤组(46.3±0.9)%明显增高(P<0.01)；终浓度为100 μl/L H22及10 μl/L BIQ共同干预A549细胞4 h后，可检测到凋亡标志性的DNA梯形带；实验组细胞凋亡率较对照组明显下降(P<0.05). 结论： 在一定浓度范围内，BIQ对氧化损伤的A549细胞生长有浓度依赖性的保护作用，并可抑制氧化损伤的A549细胞发生凋亡.
【关键词】 BIQ；急性病；肺/损伤；肺泡；上皮细胞
【Abstrat】AI: T explre the prtetive rle f 4hlrbenz［F］isquinline (BIQ) in xidatively daaged huan lung epithelial ell line A549. ETHDS: After ultured ith different dses f BIQ, the nral A549 ells and the xidatively daaged ells ere bth tested by TT assay. ell apptsis as deteted by DNA Ladder. ell rphlgial hange as bserved by Hehst staining under a phase ntrast irspe. RESULTS: After A549 ells ere treated ith different nentratins f BIQ, dsedependent prtetin as denstrated. The ell viability rate f the grup by 1×10-2 and 1×10-3 l/L BIQ ere respetively (76.1±0.8)% and (71.3±1.0)%， hih ere higher arkedly than the rate f the injury grup (46.3±0.9)% (P<0.01). Fur hurs after expsure t 100 μl／L H22 and 10 μl/L BIQ, A549 ells undertk the apptsis displayed by the DNA Ladder. The perentage f ell apptsis as ler in experiental grup than in ntrl grup (P<0.05). NLUSIN: In a ertain nentratin range, BIQ an dsedependently prtet huan lung epithelial ells fr xidatively daage. The ativatr f ysti fibrsis transebrane ndutane regulatr (FTR) an inhibit the apptsis f xidatively daaged A549 ells.
【Keyrds】 BIQ; aute disease; lung/injuries; pulnary alveli; epithelial ells
0引言
急性肺损伤(aute lung injury，ALI)是急性呼吸衰竭的重要病因之一. 氧化应激时产生的大量氧自由基和H22作用于肺部时可引起肺泡上皮细胞活性降低，甚至产生ALI. 肺泡上皮细胞Na+，l-异常跨膜转运在肺水肿形成中起重要作用［1］. 囊性纤维跨膜电导调节因子(FTR)是肺泡上皮细胞中一种氯通道蛋白，FTR异常可降低其对Na+通道的抑制作用，致Na+重吸收增加，加上l-分泌减少，易导致肺组织水肿. BIQ是一种FTR氯通道特异性开放剂［2-3］，能促进FTR氯通道开放，使Na+向细胞内流动增加，提高肺泡的液体清除能力. 我们采用A549细胞作为肺泡上皮细胞模型，观察BIQ对氧化应激引起A549细胞损伤的保护作用，探讨FTR氯通道及BIQ在ALI发生 发展 中的作用.
1材料和方法
1．1材料
人肺泡上皮细胞模型A549细胞由第四军医大学生物化学与分子生物学教研室惠赠. BIQ（Siga公司）；噻唑蓝(TT)（Siga公司）；DNA Ladder 试剂盒、荧光染料Hehst 33258（上海碧云天公司）；新生牛血清(杭州四季青) 1640培养液(Gib公司).
1．2方法
1．2．1噻唑蓝(TT)比色实验测定细胞存活率用含100 L/L热灭活新生牛血清的1640培养基培养A549细胞，置37 ℃，50 L/L 2及充分饱和湿度的培养箱内，隔日换培养液，直至细胞铺满瓶底的70%～80%，用胰蛋白酶消化并传代，选对数生长期A549细胞以2×103个/孔接种于2块96孔培养板，细胞贴壁培养24 h后开始干预. 第1块板分2组. 对照组：只加培养液；实验组：分别加入不同浓度的BIQ（浓度分别为1×10-1，1×10-2，1×10-3，1×10-4，1×10-5 l/L）. 反复试验8次. 第2块板分3组：对照组：只加培养液；损伤组：加入100 μl/L H22；实验组：加入100 μl/L H22后再分别加入不同浓度的BIQ（浓度分别为1×10-1，1×10-2，1×10-3，1×10-4，1×10-5 l/L）. 反复试验15次. 干预后共孵育24 h进行TT实验，每组设5个复孔. 与实验组平行设只加培养液不加细胞的空白对照孔，比色时以此孔调零. 酶联免疫检测仪测定不同药物浓度的A490 n. 以每组5个孔A490 n的平均值作为各组的平均A490 n值. 记录结果，取数次结果的平均值， 计算 各组细胞的存活率：细胞存活率=(实验组A490 n ／对照组A490 n)×100％.
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