三种猪瘟抗体检测方法比较试验研究

武威市是一个农业城市，近几年畜牧业发展比较迅速，截至到2013年，全市生猪饲养量达230.21万头、出栏量达121.19万头，但由于传统养殖方式的影响，我市主要以小型养殖场和散养户为主。猪瘟的控制主要依靠疫苗免疫预防，合理的免疫程序应建立在正确的免疫检测基础上。猪瘟疫苗免疫效果的好坏直接影响到我市养猪业的经济效益和养猪业的健康持续发展。为了养殖场（户）随时掌握猪瘟抗体水平，制定适合本场（户）的个性化免疫程序，使抗体效价始终保持在有效水平以上，笔者进行了三种猪瘟抗体检测方法对比试验，选择一种经济实用、准确方便的检测方法。
　　1 材料与方法
　　1.1 试剂
　　⑴ 猪瘟正向间接血凝抗原试剂盒，包括（猪瘟正向血凝抗原（批号100929）和标准阳、阴性血清，由中国农科院兰州兽医研究所提供。
　　⑵ 猪瘟Dt-ELISA诊断试剂盒，中国农科院哈尔滨兽医研究所提供。
　　⑶ 猪瘟抗体免疫会标试纸条。厦门市格林沃动物生物技术开发有限公司提供（试剂批号：20080618）。
　　1.2 血清样品
　　在武威市某屠宰场随机选择10头育肥猪，耳静脉采集血清（编号A0-A9）1.5 L～2 L/头；在武威市随机选择10头产前2周母猪，耳静脉采集血清（编号B0-B9）1.5 L～2 L/头；随机选择10头40日龄左右的仔本文由论文联盟.Ll.收集整理猪，前腔静脉采集血清（编号0-9）1.5 L～2 L/头。
　　1.3 方法
　　1.3.1 正向间接血凝试验
　　猪瘟诊断技术规程（NY/SY156‐2000）规定进行操作。
　　1.3.2 Dt-ELISA法和免疫金标试纸检测法
　　按照试验说明操作。
　　1.4 试验结果的统计分析
　　1.4.1 试验数据表达方法
　　为了数据统计分析方便，规定文中提到的猪瘟间接血凝滴度用以2为底的对数lg2表示，如猪瘟抗体滴度为l∶64，用lg2表示，简写为6；Dt-ELISA滴度以1∶80为基数，设定为4，即1∶160表示为6；金标试纸条阳性用&ldqu;+&rdqu;表示。
　　1.4.2 阳性判定标准
　　间接血凝滴度≥4、Dt-ELISA滴度≥4、金标试纸条出现红色检测线，均表示结果为阳性。
　　2 结果
　　2.1 三种猪瘟抗体检测方法比较试验结果见表1
　　3 结果分析
　　（1）结果表明，间接血凝法、Dt-ELISA法和金标试纸条法的结果基本相同，其阳性率依次为90 %、86.7 %和80 %。金标试纸条法与间接血凝法相比，阳性率比较低，可能是因为金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，检测时所用试剂（试剂批号：20080618）投入市场不久，在质量稳定性方面可能还存在一些问题。但间接血凝法与Dt-ELISA法相比，结果不一致的占3.3 %；与金标试纸条法相比，结果不一致占10 %。Dt-ELISA法与金标试纸条法相比，结果不一致的占6.7 %。经方差分析，三者之间差异均不显著。
　　（2）从操作方面，免疫金标试纸条操作最为简便，不需要仪器设备，样品也不必进行预处理，可直接检测猪全血或血清，减少了试验过程中的人为误差，反应时间短，可随时随地进行检测。间接血凝实验及Dt-ELISA实验均需专门的试剂及具有一定经验的专业实验操作人员，所需时间均在3 h～4 h以上。间接血凝实验结果可以到第2天再来观察（室温下或37 ℃静置1.5 h～2 h，这个时间可以延长），实际操作时间可以较为灵活。Dt-ELISA实验操作最为繁琐.主要是快诊膜不易做记号，易碎，不易剪，而且手不能碰及，否则会影响实验结果。
　　（3）从经济方面，Dt-ELISA试剂盒由于试剂一开瓶就必须全部用完，一盒可检测50头份左右，若只检测10头份也得全部用完试剂，造成很大浪费。间接血凝实验可以根据检测数量的多少来使用检测试剂，较为节约。金标试纸条因为是一份血清用一张试纸条，所以不存在浪费问题。
　　4 结论

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